后固定：胃蛋白酶消化后才需要。固定液为1%多聚甲醛/0.1 M PBS（PH7.2-7.6），分子病理技术服务，含有1/1000 DEPC。室温固定 10分钟。蒸馏水洗涤3次。
原位杂交的预杂交：湿盒的准备——干的杂交盒底部加20%甘油20ml以保持湿度。按每张切片20μι加预杂交液。恒温箱38-42℃2—4小时。吸取多余液体，不洗。
杂交——按每张切片20μι杂交液，加在切片上。将原位杂交专1用盖玻片的保护膜揭开后，盖在切片上。恒温箱38-42℃杂交过夜(根据杂交情况可以调节)。
杂交后洗涤：揭掉盖玻片，37℃左右水温的2×SSC洗涤5分钟×2次；37℃0.5×SSC洗涤15分钟×1次; 37℃0.2×SSC洗涤15分钟×1次(如果有非特异性染色，重复0.2×SSC洗涤15分钟×1-2次)。
意义
免yi组织化学的临床应用主要包括以下几方面：
（1）的诊断与鉴别诊断；
（2）确定转移性的原发部位；
（3）对某类进行进一步的病理分型；
（4）软组织的一般需根据正确的组织学分类，因其种类多、组织形态相像，有时难以区分其组织来源，应用多种标志进行组化研究对软组织的诊断是不可缺少的；
（5）发现微小转移灶，有助于临床方案的确定，包括手术范围的确定。
（6）为临床提供方案的选择。
原位末端凋亡检测（Tunel）
实验原理： TUNEL技术可对组织或细胞中凋亡小体或单个凋亡细胞进行染色，能准确反映细胞凋亡典型的生物化学和形态特征。凋亡细胞内内源性核酸内切酶被而将自身染色体DNA切断成缺口或3-OH末端片段这一特点，利用脱氧核苷酸末端转移酶将标有标记物(如，生物素或荧光素)的脱氧核苷酸转移到3-OH末端，再用组化法或荧光检测凋亡细胞。
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