生化标志物（蛋白 / 核酸 / 脂质）
蛋白标志物：
植物特有：TET8、PEN1、SYP121、HSP70等膜转运 / 热激蛋白。
通用：CD63/CD9/TSG101交叉反应弱，不推荐；优先 WB + 质谱。
核酸：小 RNA 测序、qPCR 检测 miRNA/sRNA；外泌体富集特定 RNA。
脂质：磷脂、鞘脂、胆固醇；质谱分析脂质组。
二、纯度与完整性检测
BCA+NTA：计算粒子 / 蛋白比（particles/mg），外泌体检测服务，比值越高纯度越好。
Triton X?100 破膜实验：验证膜结构完整性；破膜后 NTA 颗粒数显著下降。
排除污染：检测叶绿体 / 线粒体标志物、多糖、多酚、果胶（植物样本易污染）。
植物外泌体检测的功能，主要是鉴定它是什么、有什么活性、能不能用，分成基础鉴定功能和应用验证功能两大类。
一、基础鉴定功能（判断 “是不是、纯不纯”）
确认是植物外泌体
看形态：双层膜、30–150 nm 纳米颗粒
看粒径与浓度：NTA/DLS 测大小、数量
看标志物：植物膜蛋白、小 RNA、特征脂质
评估纯度与质量
排除多糖、多酚、细胞壁碎片、叶绿体 / 线粒体污染
计算颗粒 / 蛋白比，判断纯化效果
验证膜完整性（破膜实验）
稳定性检测
不同温度、pH、冻融循环下粒径、浓度、结构变化
为储存、制剂、工艺提供依据
冷冻 TEM（近天然结构）
原理：样品快速浸入液态玻璃化，全程无化学固定 / 脱水 / 染色，在液氮低温下成像，可观察真实双层膜、内容物，适合高分辨率结构研究。
流程：3 μL 样品滴多孔碳网 → 滤纸轻吸成薄水膜 → 液态冷冻 → 液氮转移至电镜冷台（-170℃以下）成像；冷冻断层扫描（cryo-ET）可重构 3D 结构。
优点：结构保真度极高；缺点：设备昂贵、操作复杂。
超薄切片 TEM
用于细胞内 / 组织中外泌体定位，或观察群体分布；流程： + 双固定 → 梯度脱水 → 环氧树脂包埋 → 切片机切成 40–90 nm 薄片 → 醋酸铀 + 柠檬酸铅染色 → TEM 观察。
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