免疫 TEM
结合胶体金标记的特异性（如 CD63、CD9），可在电镜下直接定位外泌体表面标志物，实现形态与分子特征的同步验证。
SEM
聚焦样品表面形貌，需喷金导电处理；分辨率略低于 TEM，多用于观察外泌体在材料 / 细胞表面的附着形态，而非内部精细结构。
关键质控与判读要点
典型外泌体：30–150 nm，外泌体检测服务，双层膜，常呈杯状；无膜的球形颗粒多为脂蛋白 / 蛋白聚集体；盐结晶呈规则几何状，需区分。
样品浓度需合适（推荐≥10? particles/mL），过浓重叠、过稀难寻；PTA 的 pH 必须接近中性，避免膜损伤。
观察用低剂量模式，减少电子束对样品的辐照损伤。
植物外泌体（植物源外泌体样纳米颗粒，PELNs）检测以形态、粒径、浓度、生化组成、纯度为，优先用TEM+NTA+WB / 质谱组合鉴定，再做功能与质控检测。
一、鉴定三要素（ISEV 标准）
1. 形态学观察（TEM/SEM/AFM）
透射电镜（TEM）：金标准，可见双层膜、杯状 / 茶托状、近球形结构，粒径 30–150 nm。
扫描电镜（SEM）：看表面形貌与分散性。
原子力显微镜（AFM）：测三维形貌与膜厚度。
2. 粒径与浓度（NTA/DLS）
纳米颗粒跟踪分析（NTA）：单颗粒，给出粒径分布（30–150 nm 为主）、浓度、多分散性，适合复杂样本。
动态光散射（DLS）：测平均粒径与 PDI，适合单分散体系，不能替代 NTA。
合格参考：主峰 30–150 nm，浓度≥1×10? particles/mL。
冷冻 TEM（近天然结构）
原理：样品快速浸入液态玻璃化，全程无化学固定 / 脱水 / 染色，在液氮低温下成像，可观察真实双层膜、内容物，适合高分辨率结构研究。
流程：3 μL 样品滴多孔碳网 → 滤纸轻吸成薄水膜 → 液态冷冻 → 液氮转移至电镜冷台（-170℃以下）成像；冷冻断层扫描（cryo-ET）可重构 3D 结构。
优点：结构保真度极高；缺点：设备昂贵、操作复杂。
超薄切片 TEM
用于细胞内 / 组织中外泌体定位，或观察群体分布；流程： + 双固定 → 梯度脱水 → 环氧树脂包埋 → 切片机切成 40–90 nm 薄片 → 醋酸铀 + 柠檬酸铅染色 → TEM 观察。
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