






与传统TEM相比,Cryo-TEM无需进行固定、脱水、染色等处理,样品直接在冷冻状态下进行观察,能够地保留外泌体的天然形态和结构,反映外泌体在体内的真实状态。此外,Cryo-TEM还可以结合电子断层扫描技术,实现外泌体三维结构的重构,进一步深入了解外泌体的空间形态和内部成分分布,为外泌体的结构与功能研究提供更强大的技术支撑——冷冻电子断层扫描(Cryo-ET)结合了冷冻固定技术和电子断层扫描技术,能够在接近天然状态下重构外泌体的3D结构,分辨率可达1~2 nm,是研究外泌体空间结构的重要工具。

主流电镜技术与流程
传统透射电镜(负染 TEM,常用)
样品制备:纯化外泌体悬液(离心 + 0.22 μm 过滤),滴至 Formvar / 碳膜铜网吸附(5–30 min);2% 预固定,再用 1–2% 醋酸铀(UA)或 2% 磷钨酸(PTA,pH 6.5–7.0)负染(0.5–2 min),吸干后室温干燥。
成像参数:加速电压 80–120 kV,放大倍数 50,000–100,000×,低剂量模式避免样品损伤。
典型图像:双层膜清晰,呈亮边暗背景的杯状 / 圆形,直径符合 30–150 nm 范围;盐结晶为规则几何形、细胞碎片不规则,需排除。
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