






依托改造后的根癌农杆菌Ti质粒T-DNA转移系统,去除质粒致瘤基因,构建安全的二元载体、三元载体系统。将目的基因与筛选标记基因插入T-DNA区域,在农杆菌Vir毒蛋白的诱导作用下,T-DNA切割、转移并整合至水稻细胞核基因组,实现外源基因的稳定插入与表达。常用农杆菌菌株为EHA105、AGL-1,适配水稻愈伤组织侵染体系。
适用受体材料受体为水稻成熟种子诱导的胚性愈伤组织,材料获取不受季节、生育期限制,可全年开展转化实验;其次可选用水稻幼胚、幼穗诱导愈伤,再生能力更强,但取材受限。粳稻愈伤诱导与再生效率显著优于籼稻,籼稻是目前水稻转化的主要难点材料。
机制将外源目的基因质粒包裹在金粉、钨粉等微米级微粒表面,通过基因高压动力加速微粒,高速穿透玉米细胞壁与细胞膜,将外源DNA直接送入细胞核,进而整合到玉米基因组中。适用场景可适配玉米愈伤组织、幼胚、悬浮细胞等多种受体,不受农杆菌侵染宿主限制,适用于农杆菌转化效率极低的特殊玉米基因型,以及多基因共转化、基因编辑载体递送等特殊实验。

侵染与共培养农杆菌菌液调至OD600=0.6–0.8,愈伤浸泡侵染10–20 min,轻微震荡;侵染后捞出愈伤,无菌滤纸吸干表面所有菌液(积水是褐化、菌污染主要原因)。平铺于共培养基,25℃暗培养2–3天,以愈伤表面微微出现薄层菌膜为状态。
抗性筛选与继代共培养结束后,无菌水洗去表面农杆菌,可低浓度水洗一次,拟南芥转化,吸干水分后接种筛选培养基。首轮筛选14天后,剔除褐化、愈伤,将新生嫩黄抗性愈伤切下继代。连续2–3轮筛选,去除假阳性与残留农杆菌,获得纯净阳性愈伤群体。
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