农杆菌侵染与共培养将活化的农杆菌菌液调配至适宜OD值，拟南芥转化，将筛选后的胚性愈伤浸入菌液浸泡侵染，适度震荡保证菌液充分附着；捞出愈伤吸干表面多余菌液，接种于共培养基，25℃避光暗培养2–3天，完成T-DNA的转移与基因组整合。4. 抗性筛选与愈伤继代共培养结束后，用无菌水洗脱愈伤表面残留农杆菌，吸干水分后转入含对应筛选剂的筛选培养基，28℃避光培养。经过2–3轮继代筛选，淘汰未转化的阴性愈伤，获得增殖状态良好的抗性阳性愈伤组织。
关键影响因素与优化要点1. 受体材料基因型基因型是制约玉米转化效率的因素，传统模式材料Hi-II玉米转化效率较高，但多数骨干育种自交系天然转化效率极低。通过形态调控基因辅助技术、培养基配方优化，可有效弱化基因型依赖性，适配主流育种材料。
农杆菌侵染条件农杆菌菌液OD值、侵染时间、共培养温度与湿度直接影响转化效果。菌液浓度过高易导致幼胚褐化，浓度过低则侵染效率不足；适配的负压、离心处理可显著提升T-DNA转移效率。
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